**培养条件：** 本细胞系采用气相培养，气体组成为95%空气与5%二氧化碳，适宜温度设定为37℃。培养基为F12K，添加10% FBS和1% P/S。细胞的贴壁培养参数同样为95%空气与5%二氧化碳，37℃，F12K，10% FBS与1% P/S。

该细胞系由DJGriad建立，源自58岁白人男性的肺癌组织。A549细胞具有能力通过胞苷二磷酸胆碱途径合成高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。

**传代方法：** 在细胞汇合度未超过80%时，将瓶内的完全培养液收集至离心管，留5ml完全培养基于37℃、5% CO2的培养箱中继续培养。当细胞密度超过80%时，进行传代培养。建议第一次传代比例为1:2。传代后，建议每两天更换培养液以保持细胞生长环境的稳定。

**处理细胞：** 收到细胞后，使用75%酒精对细胞瓶外部进行消毒，然后将细胞瓶放入超净台中，以严格的无菌操作条件下处理。随后，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以帮助细胞稳定状态。

在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据。如果未提供照片，则默认为细胞状态良好。

**细胞传代步骤：** 对于贴壁细胞，首先弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞。然后加入0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，直到细胞大部分圆润并脱落，快速反向操作台，轻敲几下培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至离心管，1000rpm离心5分钟，去除上清，再补加1-2mL完全培养基重悬。最后，将细胞悬液按1:2比例分瓶传代，补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，并置于37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

**细胞冻存：** 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗。然后添加0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞变圆后终止消化，转移细胞至离心管，离心并重悬于无血清冻存液，最后将冻存管直接放入-80℃冰箱保存，必须存放24小时以上后才能转入液氮罐中。

**细胞复苏：** 从液氮中取出冻存管后，需快速将其放入37℃水浴中解冻，确保冻存管不再有结晶。随后，将细胞转移至含有5ml完全培养基的离心管中，并进行离心，最后以完全培养基重悬并接种于T25培养瓶中，置于37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

在细胞培养过程中，如发生细胞脱落现象，这被视为正常。因此，建议可收集培养瓶内的培养液进行处理，以保证细胞活力。通过这些方式，能够有效地维护细胞的健康生长，为后续实验提供可靠的细胞资源，正如金年会金字招牌诚信至上所倡导的那样，我们始终将细胞培养的标准与诚信作为优先事项。