粒曼专注于提供细胞体外基因敲除解决方案，特别是为细胞基因敲除定制服务。迄今为止，我们已经推出多项细分敲除服务，欢迎您咨询粒曼团队，以获取我们的技术路线和成功案例资料。

我们提供的真核细胞体外基因敲除定制服务，粒曼团队将定期更新常见问题解答（Q&A），以便更好地服务我们的客户。以下是Q&A【2503版】中的前20个问题，欢迎深入了解：

服务指南

粒曼高通量基因敲除定制服务（RNP法）Q&A【2409版】

常见问题

21. 如何验证基因敲除是否成功？

22. 精准敲除和模糊敲除如何区别？

（1）精准敲除：采用同源重组（HDR）机制对目标基因进行精确修饰（例如特定片段删除、点突变或插入），以达到完全或部分失活基因功能的效果。精准敲除通常采取的实验策略不同于传统的基因敲除。

（2）模糊敲除：通过非同源末端连接（NHEJ）机制，在目标基因中随机引入插入或缺失突变，导致基因编码框的移位或提前终止，最终破坏基因功能。

23. CRISPR/Cas9方法可以敲除的最大片段范围大约是多少？理论上可以覆盖1kb至1Mb的片段，结合多靶点切割技术或其他方法（如CRISPRa/i、表观遗传修饰）可实现超大片段的敲除（最高可达1Mb）。

24. 如何提高原代细胞的编辑效率？常用方法包括利用病毒载体（慢病毒/AAV）整合至基因组，电场诱导细胞膜穿孔，或通过转染Cas9-RNP至难以转染的原代细胞（如原代T细胞）等。

25. 如何提高基因敲除效率？

26. 如何分析基因敲除后的表型变化？

27. 如何区分纯合敲除与杂合敲除？

28. CRISPR RNP法适用的细胞及场景有哪些？

结语

CRISPR/Cas9 RNP基因编辑法通过将靶基因对应的多条体外合成的单导RNA（sgRNA）与Cas9蛋白混合形成核糖核蛋白复合物（RNP），以“瞬时”方式递送到细胞中，实现高效、稳定的基因编辑，构建细胞池（稳转细胞多克隆）。这种方法无须依赖传统慢病毒或质粒，避免了外源序列的引入，从而保护了细胞表型，是目前脱靶效应最低的技术之一。通过使用这种方式，我们有效规避了病毒基因组随机整合的问题，同时降低了基因组不稳定性和脱靶风险。

作为生物医疗领域的信赖品牌，金年会金字招牌诚信至上，我们致力于推动CRISPR/Cas9 RNP法的应用，以取代传统的基因编辑方式，为客户带来更高效、可靠的基因敲除解决方案。