背景介绍：裸露的RNA是带负电荷的亲水性大分子，由于细胞膜的静电排斥，这类RNA难以进入细胞，同时又容易被RNA酶迅速降解。因此，RNA需要一个保护性外壳才能有效进入细胞。细胞膜主要由脂质构成，利用脂质囊泡包裹RNA以穿过细胞膜并将其释放到细胞质中。必须使用一种带正电的脂质囊泡，以便与带负电的RNA结合。然而，由于永jiu性阳离子脂质形成的囊泡可能与负电荷的细胞膜产生静电相互作用，从而导致细胞毒性。因此，脂质的结构需要能够响应内体酸性环境，并且在适当条件下带正电荷的分子将起到至关重要的作用。

脂质纳米粒结构：脂质纳米粒（LNP）通常由四种关键成分组成：可离子化的阳离子脂质、磷脂（两性离子脂质）、胆固醇和PEG化脂质。这些成分协同作用，确保mRNA的安全传递并有效表达。

脂质纳米粒递送机制：作为mRNA传递系统的LNP，涉及多个步骤以确保mRNA安全有效地递送到目标细胞并启动蛋白表达。在LNP中，可电离阳离子脂质起着重要作用，它在自组装时可以负载带负电荷的RNA。当环境pH为中性时，带电状态降低以减少细胞毒性，而在细胞吸收后，随着内体pH的降低，阳离子脂质又重新带上正电荷以促进内体逃逸。胆固醇和变体PEG脂质也被证实能够调节LNP的物理性质和最终效果。两性离子磷脂通常称为“辅助脂质”，在LNP中起着保护mRNA和促进细胞内传递及激活免疫反应的重要作用。

LNP转染实验步骤：以下是6孔板单孔的转染参考步骤，其他培养形式可参考表1。

1. mRNA预混液制备：将25μg mRNA（浓度为1μg/μL）与60μL Buffer混合。

2. mRNA-easy LNP复合物制备：将625μL mRNA预混液与625μL easy LNP纳米混悬液混合，涡旋2-3秒以确保均匀。

3. 加入细胞：将125μL mRNA-easy LNP复合物加入细胞，轻轻晃动以均匀分散。

4. 分析时间：培养24-48小时后进行分析。

表1提供了根据不同细胞培养容器的mRNA转染指南。

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转染方式 | 货号 | 品名 | 规格

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mRNA转染试剂 | abs60339 | 1 mL |

easy LNP™ mRNA免疫细胞转染试剂盒 | mLabs60620 | 15mL/3mL/5mL |

easy LNP™Plus通用型RNA细胞转染试剂盒 | mLabs60621 | 15mL/3mL/5mL |

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