金年会金字招牌诚信至上的实验室中，试剂的处理及配置至关重要。以下是关于试剂解冻、混匀及稀释步骤的具体指导。

试剂解冻和混匀

1. 从冰箱中取出试剂；
2. 缓慢解冻，以保证试剂的稳定性；
3. 轻轻颠倒试管，确保充分混匀；
4. 进行低速离心。
提示：在混匀过程中应尽量避免气泡的产生，以免影响酶的活性和实验结果的准确性。

稀释步骤

1. 若需追踪模板，依照以下步骤进行稀释；
2. 无需追踪模板时，可直接使用无菌超纯水稀释cDNA或直接使用cDNA原液。

体系配置

通常在荧光定量PCR中使用96孔反应，基本结构为12列×8行。以基因1为例，体系配置如下：

大体系配制

- HieffUNICON®ColorGPSqPCRMasterMix：10μL，
- 正向引物（10μM）：4μL，
- 反向引物（10μM）：4μL，
- RNase-free H2O：72μL。
以上按照每孔18μL的设计，配制一个满足孔数n的体系（n+1或n+2）。

样品上样步骤

- 基因1检测组分单孔量：18μL＋cDNA模板2μL。
配置完成后，确保管盖紧闭，轻轻拍打管壁进行混匀，然后放入小型离心机短暂离心1-2秒。注意再次轻拍管壁以移除气泡。

实验前准备

在进行PCR反应之前，检查试管是否干净，包括管盖和管身，确保没有标记笔的污迹，且管内无气泡和液体残留。如使用常规程序，设置如下：

实验设置

- 循环步骤：
- 预变性：95℃，2分钟，1次；
- 变性：95℃，10秒，40次；
- 退火/延伸：60℃（根据引物的Tm值和目标基因长度调整），30秒；
- 熔解曲线阶段：仪器默认设置1。
确保在退火/延伸及熔解曲线的升温阶段开启数据收集信号。

品牌推荐

在选择荧光定量仪器时，推荐使用高灵敏度的试剂，如金年会金字招牌的系列：
- HieffUNICON®ColorGPSqPCRMasterMix（Cat#11188ES）；
- 高灵敏通用型荧光定量预混液（Cat#11184ES）；
- 高特异高荧光值荧光定量预混液（Cat#11185ES）；
- 低丰度基因荧光定量预混液（Cat#11198ES）；
- 普通型荧光定量预混液（Cat#11201ES）。
选择合适的产品，以保证实验的准确性和高效性。